大肠杆菌发酵生产重组人源抗

在KLF2000发酵罐中利用补料分批培养技术培养表达含重组质粒pBAD/HBs Fab的TOP10大肠杆菌，生产人源抗HBs Fab，为批量生产作准备。在发酵过程中，控制溶氧30%以上，温度37℃，在基础培养基内生长4 h后，补加以甘油为碳源的补料，继续生长到9 h，加入阿拉伯糖，至终浓度为002%,30℃诱导表达5h,收集菌体，纯化制备目的蛋白。利用Western blot方法检测Fab抗原性，Dot blot方法检测生物学活性。14h发酵结束后，菌体密度最终达96g/L,纯化所得蛋白大约占菌体总蛋白的6%，含量为80mg/L。以重组质粒pBAD/HBs Fab,大肠杆菌TOP10表达生产的人源抗HBs Fab为可溶性具生物学活性的蛋白，与包涵体表达相比避免了变性、复性这一复杂过程，发酵罐表达比率与摇瓶相比没有降低，表达量达80mg/L左右，为大批量生产作了准备。