Cloning and Expression of Kringle 1-3 Gene of Human Plasminogen and the Purification and Bioactivity of Its Expressed Product
人纤溶酶原K1-3基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析

纤溶酶原K13功能区是近年发现的血管生成抑制因子，具有抑制肿瘤生长和转移的活性。以人血管生成抑制素cDNA为模板用PCR技术扩增了K13功能区的基因，DNA序列分析后克隆至质粒pPIC9K上获得重组质粒pPIC9K13，转化毕节酵母GS115，用PCR和G418法筛选高拷贝转化子，进行摇瓶发酵。SDSPAGE和Western blot分析结果证实K13基因已在GS115分泌表达，并具有免疫活性。选用30L和80L罐进行高密度发酵，甲醇诱导48h细胞密度达到OD250～300，比摇瓶提高5～6倍，表达量150200mg/L。发酵上清液经Streamline SP离子交换及PhenylSephorose疏水层析纯化，在SDSPAGE上显示一条带，纯度96%，动物实验证明纯化产物具有抗血管生成和抗肿瘤的活性。 