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生物工程学报 2002
葡萄糖异构酶突变体酶GIG138P和GIG138P-G247D在变铅青链霉菌中的高效表达及检测Keywords: 葡萄糖异构酶，,突变体酶，,穿梭载体，,变铅青链霉菌，,高效表达 Abstract: 将含有G138P单点突变和G138P-G247D双点突变的GI结构基因，分别克隆入E.coli链霉菌穿梭载体pHZ1272，成功构建了穿梭表达载体pHZGI1和pHZGI2。通过原生质体的转化，将穿梭表达载体导入变铅青链霉菌TK54菌株。30℃振荡培养24h，加入2 μg/mL 硫链丝菌素诱导表达12h。SDSPAGE电泳表明，两个穿梭载体在TK54菌株内表达出425 kD特异性条带。薄层扫描显示，突变体酶GIG138P和GIG138PG247D分别约占可溶性蛋白的19%和22%。Western杂交进一步证实GIG138P和GIG138PG247D在变铅青链霉菌TK54中获得了表达。
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