Cloning and Expression of Human Protein Disulfide Isomerase cDNA in Escherichia coli Supported by the Beijing Municipal Natural Science Fundation (No.5962006).
人蛋白质二硫键异构酶Cdna基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

从人胚胎肝组织中分离纯化出总RNA，在总RNA中提取mRNA，经逆转录得到cDNA第一条链，并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物．进行PCR合成人蛋白质二硫键异构酶(Proteim disulfide isomerase，PDI)cDNA基因，将所得cDNA克隆到质粒pUCl8上，转化大肠杆菌DH5a细胞，进行诱导表达筛选和活性筛选。将筛选的基因克隆到载体pBV220上，在大肠杆菌细胞中表达，产物以溶解形式在胞浆中表达。表达产物经硫酸铵分级沉淀和DEAE Sepharose Fast Flow柱层析分离，产物的纯度与活性分别为90％、1100u／g。