Cloning, Expression, Purification and Function Research of Recombinant Human FLT3 Ligand
重组人FLT3配体的克隆、表达及功能鉴定

通过克隆人FLT3配体(rhFL)基因，建立其原核高效表达系统，为大规模获得rhFL产品，促进干细胞体外扩增移植等新技术在临床的应用创造条件。分离人外周血单个核细胞，提取总RNA，采用RT-巢式PCR扩增可溶型FL基因，以双脱氧终止法进行DNA序列分析；将目的基因与pProEXHT载体连接，重组体引入大肠杆菌并在IPTG诱导下表达；亲和层析纯化表达产物，观察其刺激CD34+细胞增殖的情况。从人外周血单核细胞中克隆得到长481bp的rhFL基因，测序结果与已知人FL基因序列一致；rhFL的表达量约占菌体蛋白总量的15%，经亲和纯化纯度达90%以上；rhFL+G-CSF+EPO刺激CD34＋细胞增殖约400倍。获得了rhFL基因及其在大肠杆菌中的高效表达，初步建立了产物纯化途径，纯化后的rhFL具有较强的刺激造血干/祖细胞增殖的能力。