Studies on High Level Expression of Recombinant Human Granulocyte Colony- stimulating Factor cDNA in Mammalian Cells
重组人粒细胞集落刺激因子Cdna在哺乳动物细胞中高效表达的研究

利用PCR反应、DNA测序、基因重组等技术，构建了两个表达人粒细胞集落刺激因子cDNA的重组质粒pED－GCSF和pEF－GCSF，两质粒分别转染COS7细胞作瞬时表达，转染CHO－dhfr－细胞作稳定表达。结果两质粒在COS7细胞和CHO细胞均获得了表达，pED－GCSF转染COS7细胞48h、72h的表达量分别为5.2×104pg/ml和2.3×105pg/ml，pEF－GCSF转染COS7细胞后48h、72h的表达量分别为2.8×105pg/ml和1.4×105pg/ml。转染CHO－dhfr－细胞，随着加入的氨甲喋呤(MTX)浓度升高，CHO－dhfr+克隆数减少，但平均每个克隆的rhG－CSF表达量升高，在0.5μmol/L MTX下最高表达rhG－CSF细胞株的量是4.46μg/ml/3d。且表达的rhG－CSF注射小鼠腹腔可提高小鼠外周血白细胞的数量。