Molecular Cloning of a Chitinase Gene from Bacillus circulans C 2
环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因的克隆

环状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｃｉｒｃｕｌａｎｓ）Ｃ２总ＤＮＡ经ＰｓｔＩ部分酶切后分离２～１０ｋｂ的片段，插入质粒ｐＵＣ１９的ＰｓｔＩ位点，转化大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ），利用几丁质平板从约８０００个重组子中筛选到一个几丁酶基因阳性克隆（命名为ｐＣＨＴ１）。用１２种限制酶对重组质粒进行的酶切分析表明，重组质粒中的插入片段长３０ｋｂ，其中各有一个ＫｐｎＩ，ＳａｃＩ和ＳｓｐＩ位点。把该克隆片段反向插入ｐＵＣ１９的ＰｓｔＩ位点所得到的重组子同样具有几丁酶基因表达活性，说明此片段含有一个完整的几丁酶基因，其自身的启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实了该片段来自于Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓＣ２基因组，且以单拷贝形式存在，它不能与来自于其它７株几丁酶产生菌的总ＤＮＡ杂交。