era因的高表达

为了高表达产生Era蛋白，借助计算机从Gene Bank中寻找N端几个氨基酸序列与Era相同的蛋白质，选其中能在大肠杆菌内高表达的λEa8．5蛋白，以其基因5’端序列替代天然ern基因5’端序列，从而赋予era基因转录物以强的翻译起始信号，而不改变其编码的氨基酸序列。将此重组era基因置于PL启动子下游、构建得质粒pCE3l，引入大肠杆菌TAPl06，经诱导后大量合成Era蛋白，且其他蛋白质的合成显著被抑制，从而使Era的含量能超过菌体总蛋白量的80％。经简单裂菌、洗涤步骤，就获得具有能特异结合鸟苷酸活性的、电泳单带纯的：Era蛋白。