Preparation and applications of monoclonal antibody against the pathogenic Harveyi from Pseudosciaena crocea
大黄鱼病原哈维氏弧菌单克隆抗体的制备及其应用

用甲醛灭活哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）GYC1108-1制备免疫原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）对杂交瘤进行筛选，阳性克隆经2－3次亚克隆后，共获得5株针对GYC1108-1的单克隆抗体。选取1B7制备小鼠腹水抗体，其细胞上清及腹水效价分别为1∶3200和1∶32000。同样用灭活的哈维氏弧菌免疫新西兰大白兔，5次免疫后颈动脉采血，离心取血清，并用饱和硫酸铵法进行纯化，制备了兔抗哈维氏弧菌多克隆抗体，其ELISA效价为1∶51200。利用1B7单克隆抗体和兔抗哈维氏弧菌多克隆抗体以及山羊抗小鼠HRP酶标二抗，建立了检测哈维氏弧菌的三抗体夹心酶联免疫吸附试验（TAS-ELISA）方法。该方法对哈维氏弧菌的最小检出浓度为1×104个/mL。用该TAS-ELISA方法检测大黄鱼（Pseudosciaena crocea）样品，54尾患病大黄鱼中有45尾检出哈维氏弧菌，而14尾健康大黄鱼都没有检出哈维氏弧菌。由此可见，本试验建立的TAS-ELISA方法，可以用于患病大黄鱼哈维氏弧菌的快速诊断。