双峰驼血清IgG亚型的分离纯化及多克隆抗体的制备

摘要 双峰驼IgG亚型包含IgG1、IgG2和IgG3，其中IgG2和IgG3为重链抗体，在结构上与IgG1存在显著差异。为获取双峰驼血清中的IgG1、IgG2和IgG3，并分析其抗原特异性和抗体特异性，本文交替使用Protein A和Protein G亲和层析柱，对其分离纯化，并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定；之后分别制备兔抗双峰驼IgG1、IgG2和IgG3的多克隆抗体，通过ELISA对制备的多克隆抗体的效价进行测定；最后应用Western blot评估这三个亚型多克隆抗体的特异性，进而对双峰驼血清中IgG1、IgG2和IgG3的抗原特异性进行分析。结果表明，应用Protein A和Protein G亲和层析柱成功分离纯化出双峰驼血清中的IgG1、IgG2和IgG3；并制备兔抗双峰驼IgG1、IgG2和IgG3的多克隆抗体效价均在1∶10000以上，并且所获得的多克隆抗体分别与IgG1、IgG2和IgG3之间均存在交叉反应，但兔抗双峰驼IgG1多克隆抗体较其它两个亚型多克隆抗体特异性低。结果证明，双峰驼IgG1、IgG2和IgG3均具有良好的免疫原性，三者结构虽存在显著差异，但其抗原特性类似