清络通痹方对佐剂性关节炎大鼠破骨细胞分化相关miRNA表达的影响

目的观察清络通痹方（Qingluo Tongbi Compound，QTC）对佐剂性关节炎（adjuvant induced arthritis， AIA）大鼠骨破坏相关miRNA表达的影响，探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法建立AIA大鼠滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞模型，应用miRNA芯片的方法初步筛选破骨细胞分化后期miRNA的异常表达谱，并采用实时定量PCR（RT-PCR）对芯片结果进行验证。制备QTC含药血清和空白血清，将破骨细胞随机分为空白组、空白血清组及QTC组，采用RT-PCR检测QTC对差异表达miRNA的影响，并应用生物信息学软件对关键性miRNA进行分析。结果与单核细胞比较，破骨样细胞分化过程中存在明显差异表达的miRNAs共211个，其中表达上调88个，表达下调123个。RT-PCR 验证结果与芯片检测结果表达趋势一致。RT-PCR 结果显示， QTC 干预后miR-140-5p 表达明显上调，生物信息学分析结果显示miR-140-5p靶基因显著富集在肌动蛋白细胞骨架的调节、Ras信号通路、cAMP信号通路和Rap1信号通路等信号通路上。结论破骨样细胞分化后期存在多种miRNAs失调，QTC可能通过影响miR-140-5p的表达参与调控破骨细胞的分化