肾元颗粒含药血清对高糖诱导人肾小管上皮-间充质细胞转分化中Klotho/FGFR1/FGF2信号途径的影响

目的探讨高糖诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）上皮-间充质细胞转分化过程中Klotho/FGFR1/FGF2信号转导途径的表达及肾元颗粒含药血清的干预作用。方法30只Wistar大鼠采用随机数字表法分为空白组、肾元颗粒组及厄贝沙坦组，每组10只，灌胃7天后门静脉取血。采用CCK-8法测定细胞增殖率以确定大鼠血清加入浓度，以LDH法检测含药血清对HK-2细胞的毒性作用。以高糖（30 mmol/L）诱导HK-2细胞上皮-间充质细胞转分化建立模型，分为正常组、模型组、高渗对照组、肾元颗粒组、厄贝沙坦组及ERK阻断剂组。免疫荧光检测Klotho及FGF2的表达，Western blot及RT-PCR检测Klotho、FGF2、E-Cadherin、α-SMA、FN、Collgen Ⅳ蛋白及mRNA表达水平，Western blot分析各组细胞ERK及磷酸化ERK（p-ERK）水平。结果CCK-8法结果显示大鼠空白血清培养HK-2细胞最佳浓度为20%。LDH结果显示，与10%胎牛血清比较，肾元颗粒含药血清、厄贝沙坦含药血清对细胞LDH 活性的影响差异无统计学意义（P>0.05）。与正常组比较，模型组Klotho、E-Cadherin蛋白及mRNA表达降低（P<0.05），FGF2、α-SMA、FN、Collgen Ⅳ蛋白及mRNA表达增高（P<0.05），p-ERK水平显著增高（P<0.05）。与模型组比较，肾元颗粒组Klotho、E-Cadherin蛋白及mRNA表达显著增高（P<0.05），FGF2、α-SMA、FN、Collgen Ⅳ蛋白及mRNA表达显著降低（P<0.05），p-ERK水平显著降低（P<0.05）。结论肾元颗粒含药血清能改善高糖诱导的人肾小管上皮细胞转分化，其作用机制可能与调节Klotho/FGFR1/FGF2信号通路有关