基于HIF-1α介导的VEGF mRNA表达探讨膈下逐瘀汤抗肝纤维化血管新生的机制

目的 通过研究肝纤维化大鼠缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）介导的血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA表达及膈下逐瘀汤对其的影响，探讨膈下逐瘀汤改善肝纤维化血管新生的机制。方法 108只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组及膈下逐瘀汤高（GD）、中（GZ）、低（GX）剂量组，每组18只。大鼠ip 50%四氯化碳-橄榄油溶液1 mL/kg制备肝纤维化模型，每周2次，共9周。各组于造模同时给药。对照组及模型组ig无菌水10 mL/kg，NAC组ig给予NAC 0.1 g/kg；GD、GZ、GX组分别ig给予膈下逐瘀汤生药饮片浓煎液26.0、7.8、3.9 g/kg，每日给药1次。在第3、6、9周时间点，各组分别随机选取大鼠处死，Masson染色制作病理标本；免疫组织化学染色半定量分析IV型胶原（collage type IV，Col-IV）及层黏连蛋白（laminin，LN）表达水平；Real-time PCR检测HIF-1a、VEGF mRNA的相对表达量；蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测VEGF、VEGFR2蛋白表达水平。结果 与模型组比较，NAC、GD在给药第9周时均能有效抑制大鼠肝细胞外基质LN表达（P<0.05）；在给药第6、9周，NAC、GD均能有效抑制大鼠肝细胞外基质Col-IV表达（P<0.05），NAC、GD及GZ均能有效抑制大鼠肝组织HIF-1α表达（P<0.05）；在给药第6、9周，NAC和GD能有效抑制大鼠肝组织VEGF mRNA表达（P<0.05）；膈下逐瘀汤各剂量和NAC均能抑制大鼠肝组织VEGF、VEGFR2的蛋白表达（P<0.05）。结论 膈下逐瘀汤对HIF-1α介导的VEGF mRNA表达有调控作用，可能是其抗肝纤维化血管新生的作用机制之一