鹿血的PCR-RFLP鉴定研究

目的 建立鹿血聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）种间及种内鉴定方法并确定检测限度。方法 根据梅花鹿、马鹿、猪、牛、羊、鸭的细胞色素b（cytb）基因序列的差异，设计并选取DNA限制性内切酶EcoRV和MseI分别作为区分鹿和非鹿，梅花鹿和马鹿的工具。采用试剂盒法提取样品基因组DNA，经PCR扩增cytb片段后，分别进行RFLP分析；在梅花鹿血基因组DNA中分别加入不同比例非鹿类动物血基因组DNA或马鹿血基因组DNA，PCR产物用限制性内切酶EcoRV和MseI进行切割，确定检测限。结果 经PCR-RFLP分析，EcoRV切割鹿和非鹿cytb片段，前者得到2个片段（287、185 bp），后者未被切割；MseI切割梅花鹿与马鹿cytb片段，前者被切成2个片段（281、191 bp），后者被切成3个片段（281、126、65 bp），191 bp的片段作为梅花鹿血的特征片段，126 bp的片段作为马鹿血的特征片段。梅花鹿血中加入非鹿类动物血基因组DNA的检测限为3%，加入马鹿血基因组DNA的检测限为6%。结论 建立的PCR-RFLP方法可以快速鉴定鹿血及相关伪品或掺伪品，也可区分鉴定梅花鹿源的鹿血或马鹿源的鹿血，为鹿血相关产品的质量控制提供了新的技术手段