独行菜LaF3H基因克隆、序列分析及原核表达

目的 为了研究独行菜黄酮类化合物生物合成途径的关键基因，从独行菜中克隆了黄烷酮-3-羟化酶（flavanone-3-hydroxylase，F3H）基因，命名为LaF3H，并进行序列分析、原核表达和纯化。方法 根据独行菜转录组数据中LaF3H基因序列设计特异性引物，克隆LaF3H基因的cDNA序列，构建pET-32a-LaF3H原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达LaF3H重组蛋白。结果 LaF3H基因开放阅读框（ORF）长1 080 bp，编码359个氨基酸，其蛋白质相对分子质量为40 320。序列分析结果表明LaF3H具有F3H蛋白的5个保守基序，系统进化分析结果显示LaF3H蛋白与拟南芥等十字花科植物F3H蛋白同源性较高。通过构建原核表达载体pET-32a-LaF3H，在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中成功表达LaF3H重组蛋白，利用Ni2+亲和色谱得到了纯化的LaF3H重组蛋白。结论 克隆了LaF3H基因，获得LaF3H纯化蛋白，为下一步制备LaF3H蛋白抗体、酶学活性检测，研究LaF3H基因在独行菜黄酮类化合物生物合成途径中的功能奠定基础