维药毛菊苣及其易混品菊苣的位点特异性PCR鉴别研究

目的 建立维吾尔药毛菊苣及其易混品菊苣的位点特异性PCR鉴别方法。方法 采集不同地理区域的毛菊苣及其易混品，提取样品基因组总DNA。通过对其叶绿体rbcL基因片段进行扩增、测序，进行多重序列比对后根据其变异位点设计位点特异性鉴别引物，对其反应条件进行优化，确定检出限，建立位点特异性PCR鉴别方法。结果 建立的位点特异性PCR鉴别体系优化结果为30 μL反应体系包含Taq酶0.25 U、10×buffer 2.5 μL、dNTP 2.0 μL、正、反向引物各0.5 μL、总DNA 2 μL、ddH2O 22.25 μL。适宜的扩增条件为94℃预变性3 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，32个循坏；最后72℃延伸7 min。对20份毛菊苣与菊苣药材进行扩增，其中毛菊苣能够扩增出约230 bp目的片段条带，而菊苣样品则不能扩增出明显的目的条带。结论 建立并优化了毛菊苣及其易混品菊苣位点特异性PCR鉴别技术，能够准确而可靠的达到2种药材的有效鉴别