吴茱萸碱激活结肠癌细胞自噬抑制其增殖的研究

目的 探讨吴茱萸碱（evodiamine，Evo）对结肠癌HCT-116细胞自噬、增殖的影响及其可能的分子机制。方法 CCK-8法检测Evo对HCT-116细胞增殖的影响；Evo（3、6 μmol/L）处理48 h后，MDC法检测细胞内自噬小泡的数量，DHE法检测细胞内活性氧（ROS）的量，Western blotting法检测细胞自噬相关蛋白和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关蛋白的表达；Evo（6 μmol/L）分别与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）和凋亡抑制剂Z-DEVD-FMK共同作用48 h后，Western blotting法检测细胞内自噬及凋亡相关蛋白的表达。结果 与对照组比较，Evo对HCT-116细胞呈现浓度依赖性的增殖抑制作用；Evo（3、6 μmol/L）使HCT-116细胞内的ROS量升高、自噬小泡数量增加、自噬相关蛋白LC3表达增加、p62表达降低、p-AMPK及mTOR表达增加；Evo与自噬抑制剂联合给药后，细胞内LC3蛋白表达减少，而有活性的Caspase-3表达增加，Evo与凋亡抑制剂联合给药后，细胞内LC3表达增加，而有活性的Caspase-3表达被抑制。结论 Evo能够通过AMPK/mTOR通路激活自噬、抑制HCT-116细胞增殖，且细胞自噬与凋亡呈现互补作用