布渣叶查耳酮合酶基因全长cDNA克隆及其表达模式分析

目的 克隆布渣叶查耳酮合酶基因（MpCHS）全长cDNA，并对其在不同部位和不同生长阶段叶片中的表达模式进行分析。方法 以布渣叶叶片总RNA逆转录合成cDNA为模板，根据其转录组数据设计特异引物序列，PCR扩增MpCHS基因全长cDNA，经质粒连接、转化、扩培，挑选阳性克隆测序、分析并构建原核表达载体。同时，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）对MpCHS基因的表达模式进行分析。结果 成功克隆得到MpCHS基因全长cDNA（GenBank：KY472608）。生物信息学分析表明其开放阅读框为1 176 bp，编码含391个氨基酸的蛋白，其相对分子质量为42 700，理论等电点6.11，具有CHS家族蛋白3个保守的功能活性位点（165 C、304 H和337 N）和特征多肽标签序列RLMMYQQGCFAGGTVLR和GVLFGFGPGL。系统进化树分析发现MpCHS与可可、陆地棉等木本植物的亲缘关系比较近。RT-qPCR结果表明，MpCHS基因在不同部位均有表达，在叶片中的表达量随着生长过程逐步降低。结论 首次克隆得到MpCHS基因，并分析了MpCHS基因在布渣叶不同部位和不同生长阶段叶片中的表达模式，为MpCHS基因的原核表达和功能验证奠定了基础，也为进一步解析布渣叶黄酮类生物合成途径提供了参考