共转orca3/g10h双基因长春花毛状根生物碱量及转录差异研究

目的 共转orca3/g10h双基因于长春花毛状根，提高抗癌生物碱量。方法 通过构建pCAMBIA1304++orca3+g10h表达载体，利用发根农杆菌介导获得双转orca3/g10h基因长春花毛状根。利用RT-qPCR研究共转orca3/g10h基因长春花毛状根萜类吲哚生物碱（TIAs）生物合成途径中相关基因的转录差异。采用HPLC研究共转orca3/g10h基因长春花毛状根TIAs（包括长春碱、长春新碱和阿吗碱）量。结果 转基因长春花毛状根中与TIAs生物合成相关基因asα、ggpps、g10h、str、tdc、cpr、sgd和dat转录水平均较非转基因长春花普通根高。HPLC结果表明，转基因长春花毛状根总TIAs量达到58.23 mg/g，是非转基因长春花普通根的27.5倍。长春碱和长春新碱的平均质量分数均较非转基因普通根高。其中，长春碱平均质量分数最高，为51.30 mg/g，是非转基因普通根的197.3倍。结论 共转orca3/g10h基因能够有效提高长春花毛状根中TIAs量