显齿蛇葡萄实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证

目的 筛选适用于显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata实时荧光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）的内参基因。方法 设计简并引物，采用RT-PCR从显齿蛇葡萄中克隆6个候选内参基因片段，包括肌动蛋白基因（Actin）、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因（GAPDH）、18 S核糖体rRNA基因（18 S-rRNA）、α-微管蛋白基因（α-Tubulin）、β-微管蛋白基因（β-Tubulin）和多聚泛素酶基因（UBQ）。应用qRT-PCR技术检测这6个候选内参基因在显齿蛇葡萄不同组织器官中（茎尖、嫩叶、成熟叶、老叶、茎和根）的表达情况。借助GeNorm、NormFinder和BestKeeper 3种统计学软件综合评价6个内参基因的表达稳定性。通过苯丙氨酸解氨酶基因（AgPAL）的表达分析对筛选出的内参基因进行稳定性验证。结果 18 S-rRNA、GAPDH和Actin的表达稳定性较好，适合作为显齿蛇葡萄不同组织基因表达研究的内参基因，以这3个基因为内参基因分析AgPAL基因的相对表达量，结果发现它们在各组织器官中的表达变化趋势基本一致。结论 确定显齿蛇葡萄qRT-PCR分析的合适内参基因，为后续相关基因表达研究奠定基础