布渣叶黄烷酮-2-羟化酶基因cDNA克隆及其生物信息学和表达分析

目的 从布渣叶中克隆黄酮碳苷合成途径关键酶黄烷酮-2-羟化酶（flavanone 2-hydroxylase，F2H）基因，构建原核表达载体，对其进行生物信息学和表达模式分析。方法 根据布渣叶转录组数据中注释为F2H的Unigene设计特异性引物，利用PCR法扩增MpF2H基因的开放阅读框（open reading frame，ORF），基于在线工具对cDNA序列进行生物信息学分析。同时，依据F2H序列，设计特异引物，采用RT-qPCR方法对其在芽、叶、枝、花、果等组织中的表达进行测定。结果 MpF2H基因ORF全长为1 557 bp（Genbank登录号KY652921），编码518个氨基酸；相对分子质量54 500，理论等电点5.49，含有信号肽，不含跨膜域，可能定位于叶绿体。同时，MpF2H基因在不同组织中均有表达，其中在叶中表达量最高，在枝和花中表达量最低。结论 MpF2H基因在不同组织中表达量差异较大。克隆了MpF2H基因cDNA，构建了其原核表达载体pET30a-MpF2H，为MpF2H基因的原核表达和功能验证奠定了基础