核桃枝枯病小新壳梭孢巢式PCR检测方法的建立

近年来, 小新壳梭孢 Neofusicoccum parvum 导致的核桃枝枯病屡有报道, 该病防治困难, 发病率高, 是核桃的一种灾难性病害。为建立 N. parvum 的快速、灵敏的分子检测体系, 根据 N. parvum 的几丁质合酶1基因(CHS1)及其前后100 bp序列, 分别设计了两对特异性引物CT-WK3-S/CT-WK3-A和CT-N-S/CT-N-A, 建立了 N. parvum 的巢式PCR检测方法。结果表明, 建立的体系可以从不同来源的5个 N. parvum 菌株中特异性地扩增出97 bp的目的条带, 灵敏度达30 fg/μL, 是常规PCR的10倍, 而从其近缘种葡萄座腔菌属 Botryosphaeria sp. 的病原菌及其他供试菌株均未扩增出任何条带。以感染 N. parvum 的核桃组织总DNA为模板进行检测, 可以在发病早期检测出 N. parvum 的存在。本研究建立的巢式PCR体系可以为核桃枝枯病的田间检测提供思路