葡萄病毒B CP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化

葡萄病毒B Grapevine virus B (GVB)是葡萄皱木复合病中栓皮病的病原, 为开展抗GVB转基因研究, 本研究利用RT-PCR技术克隆GVB外壳蛋白(coat protein, CP)基因, 与植物表达载体pRI 101-AN连接构建植物表达载体pRI-GVB CP。采用电击转化法将植物表达载体pRI-GVB CP导入农杆菌LBA4404, 并利用农杆菌介导的叶盘转化法将外源基因导入西方烟‘37B’。共获得16个烟草再生株系, PCR检测其中3个株系为阳性, 阳性株系播种获得的64株T1代植株中有30株扩增到目的条带, 阳性率为46.9%, 表明目的基因GVB cp 成功导入烟草并可成功遗传到子代。28株T1代转基因植株接种病毒进行抗病性鉴定, 其中有6株对接种病毒GVB具有抗性