橡胶树白粉病菌分子检测技术的建立

根据橡胶树白粉菌(Oidium heveae Steinm.)基因组中的特有保守序列OHS, 设计两对特异性引物OHF1/OHR1和OHF2/OHR2。以不同地区收集的6份O. heveae（OH1~OH6）和橡胶树胶孢炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)等5种非靶标病原菌及健康橡胶树叶片基因组DNA为模板, 建立了橡胶树白粉菌PCR及nested-PCR分子检测技术, 并验证了检测体系的特异性和灵敏度。结果表明, 引物OHF1/OHR1和OHF2/OHR2对橡胶树白粉菌均具有较高的特异性和灵敏度。其中引物OHF2/OHR2能检测到10 pg/μL的橡胶树白粉菌DNA, 而以OHF1/OHR1和OHF2/OHR2组合进行nested-PCR, 其最低DNA检测浓度达到0.01 fg/μL。人工接种试验中, 当孢子接种量为2×103个/叶时, PCR和nested-PCR检测体系可分别在接种4 d和24 h后检测到目的条带。表明nested-PCR对在叶片组织中处于潜育期的橡胶树白粉菌的检测更有效, 可为橡胶树白粉菌的检测提供一种简便而准确的检测方法