利用双标准曲线法检测刺萼龙葵 SrDOG1基因的表达

双标准曲线法是基因表达定量研究中应用较广的一种相对定量检测方法。本研究结合绝对定量的原理, 对传统双标准曲线法进行了改进。以刺萼龙葵延迟萌发基因 DELAY OF GERMINATION 1 ( DOG1 ) 的表达检测为例, 选择 β-actin为内参基因, 分别将目的基因和内参基因片段插入 pEASY -Blunt Zero载体, 制作标准质粒。提取冷藏或常温储藏种子的RNA进行荧光扩增, 同时将标准质粒梯度稀释液作为模板构建标准曲线, 以此计算 SrDOG1 的相对表达量。结果表明, 双标准曲线法能够灵敏地检测 SrDOG1 基因的差异表达, 发现冷藏种子中 SrDOG1 基因的表达量较常温储藏显著增高。双标准曲线法检测结果稳定, 重现性好, 数据处理简单, 适用于多种条件下基因表达水平的比较, 为进一步系统研究刺萼龙葵 DOG1 基因的表达特性和基因功能奠定了基础