豇豆疫霉LAMP检测方法的建立

本研究以豇豆疫霉Phytophthora vignae Purss核糖体内转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)序列为靶标片段, 设计4条特异性引物, 建立了环介导等温扩增(LAMP)检测方法。特异性检测结果表明：8株不同地理来源的豇豆疫霉菌株LAMP检测均为阳性(绿色), 扩增产物用2.0%琼脂糖凝胶电泳出现特有的梯形条带, 而其他11种卵菌近缘种及12种常见病原真菌和细菌共42个菌株均未观察到这些现象。灵敏度分析显示：该方法检测灵敏度在DNA水平上可达到100 fg/25 μL。采用LAMP方法对福建建瓯和宁德采集的62份疑似豇豆疫病病株样本进行检测, 并用组织分离方法进行验证。结果表明, LAMP和组织分离方法的检出率分别为67.7%(42/62)和61.3%(38/62)。综合以上结果, LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、快速高效、操作简单的特点, 适合基层部门用于田间豇豆疫霉快速检测