鸭源新城疫病毒M蛋白核定位信号突变影响病毒的毒力和复制能力

[目的]研究鸭源新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）M蛋白核定位信号（nuclear localization signal，NLS）突变对其毒力和复制能力的影响。[方法]利用鸭源NDV SS1株P基因和F基因上的AgeⅠ和Bstz17Ⅰ酶切位点，将overlap PCR方法获得的M蛋白NLS突变的片段替换到pNDV/SS1GFP中获得全长质粒pNDV/SS1GFP-M/NLSm。通过反向遗传学技术拯救M蛋白NLS突变体病毒，并对拯救的病毒进行血凝（hemagglutination，HA）试验、荧光试验和M基因测序鉴定。另外，对突变体病毒进行M蛋白的亚细胞定位观察，以及病毒的生物学特性、空斑形成能力和体外增殖能力测定。[结果]成功构建M蛋白NLS突变的全长质粒pNDV/SS1GFP-M/NLSm。细胞转染物接种鸡胚后的第1代尿囊液无HA效价，盲传3代才能检测到拯救病毒的HA效价。进一步的荧光试验和M基因测序确定拯救的病毒是突变体病毒rSS1GFP-M/NLSm。与亲本病毒rSS1GFP相比，突变体病毒M蛋白由细胞核定位变为细胞质定位。此外，突变体病毒的毒力、在鸡胚上的复制能力以及在细胞中的空斑形成能力显著降低，并且感染细胞后产生的细胞病变轻微，M蛋白和绿色荧光蛋白的表达量均降低，说明M蛋白NLS突变使病毒的体外增殖能力受到抑制。[结论]NLS突变导致的M蛋白细胞核定位功能丧失可明显降低鸭源NDV的毒力和复制能力