苏云金芽胞杆菌Sigma H对芽胞形成的影响

[目的]检测苏云金芽胞杆菌HD73中的转录调控因子Sigma H（σH）对spo0A基因转录的调控作用；异源表达纯化Sigma H蛋白，验证其对spo0A基因启动子的直接结合；检测sigH基因的缺失对苏云金芽胞杆菌HD73芽胞形成和晶体蛋白产生的影响。[方法]通过测定spo0A基因启动子指导的β-半乳糖苷酶活性评价spo0A基因在苏云金芽胞杆菌HD73野生型和sigH缺失突变体中的转录水平；通过PCR扩增苏云金芽胞杆菌HD73的sigH基因并插入到表达载体pET21b上，将质粒转入到表达菌株BL21（DE3）中，得到重组菌株BL21（pETsigH）；利用镍柱亲和纯化和阴离子交换纯化得到纯化的Sigma H蛋白；通过凝胶迁移实验（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）验证Sigma H蛋白与spo0A基因启动子的直接结合；通过显微镜观察、活芽胞计数的方法对突变株HDΔsigH进行表型特征分析。[结果]sigH缺失后，spo0A基因转录活性降低；在大肠杆菌中正确表达并纯化出大小约为28 kDa的Sigma H-His蛋白；EMSA结果表明纯化后的Sigma H-His蛋白可与spo0A基因启动子结合；镜检和活芽胞计数结果表明突变株HDΔsigH无法产生芽胞和蛋白晶体。[结论]Sigma H蛋白通过与spo0A基因启动子结合直接调控spo0A基因的表达且sigH基因的缺失阻断了苏云金芽胞杆菌中芽胞和晶体蛋白的产生