肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD的基因敲除、表达及酶学特征

[目的] 以肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD为对象，构建基因缺失株及表达纯化该蛋白，为研究其在肠炎沙门菌致病性与应激等方面的作用奠定基础。[方法] 参考GenBank登录的肠炎沙门菌基因组序列设计用于slyD基因敲除及原核表达的特异引物，运用自杀质粒介导的同源重组技术对肠炎沙门菌C50041 slyD基因进行敲除，构建C50041ΔslyD缺失株；原核表达SlyD蛋白，通过α-糜蛋白酶耦联法对其PPIase活性进行测定；利用生物信息学相关软件，分析SlyD蛋白的氨基酸序列及功能域。[结果] PCR鉴定与测序结果证明成功构建了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株，其生长特性与野生株基本一致；SDS-PAGE及PPIase活性分析表明，获得了具有生物活性的可溶性SlyD蛋白；生物信息学分析显示SlyD蛋白由FKBP样肽脯氨酰顺反异构酶结构域、分子伴侣功能域和金属结合区域3个功能区域组成。[结论] 成功获得了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株和具有PPIase活性的重组SlyD蛋白