甲基化受体蛋白MCP2923在睾丸酮丛毛单胞菌CNB-1趋化过程中的作用

[目的]MCP2923是睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni） CNB-1的一种甲基化趋化受体蛋白，本研究旨在阐明其在CNB-1菌株趋化过程中的作用。[方法]利用游动平板法（swimming plate）检测了CNB-1及其MCP突变菌株CNB-1△20、CNB-1△MCP2923、CNB-1△20/pDSK519-MCP2923、CNB-1△20/pBBR1MCS-2-MCP2923和CNB-1△20/pBBR1MCS-2-MCP2923△LBD对35种芳香族化合物以及9种小分子有机酸的趋化性；进一步利用Agarose-in-plug法表征了MCP2923介导的对芳香族化合物的趋化表型；结合生物信息学分析，对MCP2923配体结合结构域（MCP2923LBD）进行了克隆、表达和纯化，利用等温滴定量热法（ITC）检测了MCP2923LBD与原儿茶酸等11种化合物的相互作用。[结果]CNB-1对原儿茶酸、4-羟基苯甲酸等12种芳香族化合物以及顺乌头酸等9种TCA循环中间代谢产物具有强、中强和弱3个层次的趋化表型；敲除MCP2923基因减弱了菌株对上述趋化诱导物的表型；将MCP2923基因回补到CNB-1△20菌株中可回补菌株对15种趋化效应物的表型，敲除MCP2923基因的配体结合区丧失了对15种趋化物的表型回补能力。虽然Agarose-in-plug法检测到了菌株对原儿茶酸和4-羟基苯甲酸的趋化表型，但ITC未能检测到原儿茶酸和4-羟基苯甲酸等11种化合物与MCP2923LBD直接的相互作用。[结论]MCP2923可引发CNB-1菌株对多种芳香族化合物以及小分子有机酸的趋化表型，且MCP2923LBD在这个过程中起关键作用；由于ITC的结果不能证明MCP2923LBD与芳香化合物和小分子有机酸等效应物的直接结合，推测MCP2923引发CNB-1趋化作用的机制不同于已报道的MCP2201和MCP2901的作用方式，其确切机制还有待于进一步深入研究