肠道中乳酸杆菌属特异性定量引物的筛选及验证

[目的]乳酸杆菌与人和动物的健康有密切关系，它的存在及含量变化可以作为评价宿主健康的指标之一。在乳酸杆菌定量研究中，特异性引物往往是定量成功的关键。然而，已有引物质量参差不齐，难以保证其特异性。本文旨在通过理论与试验的方法快速筛选出用于定量的乳酸杆菌属特异性引物，同时为今后引物筛选和设计提供理论基础。[方法]查阅文献、挑选出12对基于16S rRNA基因序列设计的乳酸杆菌属引物，通过MEGA 6.0软件确定引物相对位置，计算引物匹配率，以引物相对位置和匹配率为依据重新组合引物，获得理论特异性乳酸杆菌属引物，再通过琼脂糖凝胶电泳和QX200 Droplet Digital PCR系统对新组合引物的特异性进行检验。[结果]通过理论与试验相结合的方法确定了一对特异性较好的乳酸杆菌属定量引物Lab1，它的扩增产物大小约300 bp。ddPCR系统检验结果发现其特异性和灵敏性较好，还可以有效定量粪便中的乳酸杆菌。[结论]引物设计理论结合特异性试验这种方法可以快速有效地筛选出特异性较好的引物，同时为今后引物筛选和设计提供理论基础