红球菌R04联苯/多氯联苯代谢相关调控蛋白RHOGL007659的生理功能

[目的]研究红球菌（Rhodococcus sp.）R04调控蛋白RHOGL007659的生理功能及其缺陷菌株的代谢特性，初步探究红球菌R04降解联苯的调控机制。[方法]通过基因同源重组敲除红球菌R04联苯代谢相关基因RHOGL007659。比较红球菌R04（野生型）和缺陷型菌株R04Δ7659（基因RHOGL007659缺陷型的R04）在不同碳源培养下的生长情况，HPLC分析R04和R04Δ7659转化联苯的能力。提取R04和R04Δ7659的总RNA，实时荧光定量PCR检测联苯降解关键基因的转录表达。纯化BphB（联苯降解脱氢酶）和BphD（联苯降解水解酶），制备多克隆抗体。Western blot分析BphB和BphD蛋白在R04和R04Δ7659中的表达水平。[结果]获得了RHOGL007659基因的缺陷型菌株R04Δ7659，与R04相比，R04Δ7659在联苯培养条件下的生物量趋近于零。HPLC分析表明，RHOGL007659基因的缺失使红球菌R04丧失转化联苯的能力。实时荧光定量PCR结果表明，在联苯培养条件下，缺失RHOGL007659后的R04，其联苯降解关键基因均有不同程度的下调表达。Western blot分析显示RHOGL007659缺失后，联苯降解关键酶BphB和BphD表达量均降低，这与实时荧光定量PCR结果相一致。[结论]RHOGL007659是红球菌R04联苯降解关键基因簇的调控蛋白，该蛋白对红球菌R04代谢联苯过程具有正调控作用