蜱传脑炎病毒跨过血脑屏障的体外实验

[目的]构建蜱传脑炎病毒（Tick-borne encephalitis virus，TBEV）跨血脑屏障研究的体外细胞模型，研究2种不同细胞的TBEV培养物在病毒跨过血脑屏障中的主要差异，从而为进一步TBEV跨血脑屏障的分子机制研究奠定基础。[方法]利用人脑微血管内皮细胞（Human brain microvascular endothelial cells，hCMEC/D3）构建体外血脑屏障的细胞模型。用BHK-21细胞中培养的蜱传脑炎病毒感染人脑微血管内皮细胞，检测TBEV在hCMEC/D3中的复制增殖情况；将TBEV加入体外血脑屏障模型的上层微孔中，用实时荧光定量PCR和噬斑测定的方法检测跨过血脑屏障的病毒量；将感染TBEV的人单核细胞加入血脑屏障模型的上层微孔中，观察渗漏进下层孔中的淋巴细胞，并用实时荧光定量PCR和噬斑测定的方法检测跨过血脑屏障的病毒量。利用伊文思蓝标记的白蛋白确定血脑屏障细胞的渗透率变化。[结果]实时荧光定量PCR和病毒滴度测定结果表明，TBEV不能在hCMEC/D3细胞中复制增殖，也不能直接跨过血脑屏障；然而，人单核细胞THP-1感染TBEV后，尽管单核细胞不能直接携带TBEV跨过血脑屏障，但THP-1中产生的病毒却能跨过血脑屏障模型进入下层孔中，并引起血脑屏障渗透率的增高。[结论]单核细胞有助于TBEV跨过血脑屏障