青枯雷尔氏菌胞外多糖合成缺失突变株构建及其生物学特性

[目的]由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的植物青枯病是一种毁灭性土传病害。胞外多糖（extracellular polysaccharides，EPS）是青枯雷尔氏菌关键的致病因子之一。通过构建胞外多糖缺失突变株，研究胞外多糖在青枯病致病中的作用。[方法]从青枯雷尔氏菌FJAT-91的基因组中克隆出胞外多糖合成结构基因epsD同源臂，克隆至自杀性质粒pK18mobsacB，再将庆大霉素抗性基因（Gm）插入同源臂中间，获得重组质粒pK18-epsD。将重组质粒转化至青枯雷尔氏菌FJAT-91感受态细胞中，通过同源重组敲除epsD基因，获得EPS合成缺失的突变株FJAT-91ΔepsD。研究突变株与野生菌株在菌落形态、胞外多糖合成、运动能力、定殖能力的差异性。[结果]突变菌株FJAT-91ΔepsD与出发菌株FJAT-91相比：胞外多糖产量显著减少，生长较慢；泳动能力（swimming motility）和群集运动能力（swarming motility）显著降低；在番茄苗根部和茎部的定殖能力显著降低；弱化指数（AI）为0.905，鉴定为无致病力菌株。[结论]胞外多糖在青枯雷尔氏菌的致病中起着关键的作用，本课题研究成果为开发植物疫苗提供了优良的材料与研究基础