腾冲嗜热厌氧菌丙氨酸消旋酶底物通道氨基酸位点的功能

[目的]通过定点突变探究腾冲嗜热厌氧菌MB4中生物合成型丙氨酸消旋酶TtAlr底物通道内氨基酸位点A172和S173的功能。[方法]利用定点突变PCR技术构建突变体，通过亲和层析法纯化酶蛋白，采用D-氨基酸氧化酶偶联法检测各突变蛋白的活性及其稳定性。[结果]通过定点突变PCR成功得到8个突变体，酶学特性分析发现，A172位点突变为丝氨酸（S）后酶蛋白的相对活性有所提升，但含有该位点突变的酶蛋白稳定性均大幅下降；S173位点突变为天门冬氨酸（D）后导致突变体蛋白的最适反应温度提升了15℃，半衰期大幅延长，但相对活性明显下降。[结论]丙氨酸消旋酶TtAlr底物通道内A172和S173位点均是影响酶蛋白催化活性和稳定性的关键位点