结核分枝杆菌Rv3194c蛋白的亚细胞定位

[目的]Rv3194c基因编码的是结核分枝杆菌的PDZ信号蛋白，本研究探讨该蛋白的亚细胞定位，为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础。[方法]从H37Rv基因组中扩增出编码只含有PDZ结构域的tRv3194c（Rv3194c 1-234 aa）的基因片段，在3'端加T2A和EGFP序列，一并插入真核表达载体构建出pcDNA3.1-tRv3194c-T2A-EGFP。将构建好的质粒瞬时转染L929细胞，并共感染重组痘苗病毒vTF7-3，用间接免疫荧光、流式细胞分选以及Western blotting检测融合蛋白的表达以及亚细胞定位。[结果]成功构建出真核表达载体pcDNA3.1-tRv3194c-T2A-EGFP，瞬时转染L929细胞后融合蛋白tRv3194c定位于线粒体膜上，且重组痘苗病毒vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高。[结论]Rv3194蛋白的PDZ结构域与线粒体外膜相关蛋白结合，为了解该蛋白在细胞内的致病机制提供重要线索