缺失宿主Vta1蛋白的MIT结构域对杆状病毒AcMNPV复制的影响

[目的]克隆草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）Vta1基因，检测Vta1在苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus，AcMNPV）复制中的作用。[方法]利用反转录-PCR与PCR方法筛选草地贪夜蛾Vta1基因及缺失Vta1 N-端MIT结构域的突变体并构建其瞬时表达质粒，通过转染Sf9细胞检测表达；构建Vta1及其突变体的双分子荧光互补表达质粒，并通过瞬时转染检测其与Vps4及ESCRT-III亚基Vps46与Vps60的相互作用；共转染gp64与Vta1及其突变体瞬时表达质粒，检测瞬时表达Vta1突变体对AcMNPV出芽型病毒产量及病毒基因启动子指导报告基因表达的影响。[结果]获得了草地贪夜蛾Vta1基因。氨基酸序列相似性分析表明，昆虫、酵母与人类Vta1同源蛋白的相似性分别约为20%与50%。Western blotting分析表明GFP标签的Vta1及其突变体均能在瞬时转染的Sf9细胞中表达。双分子荧光互补分析发现，缺失第1个或第2个MIT结构域显著降低Vta1突变体与Vps4、Vps46或Vps60的相互作用。此外，瞬时表达Vta1突变体显著降低了AcMNPV感染性出芽型病毒的产量，但并未影响AcMNPV ie1基因早期启动子和p6.9基因晚期启动子指导的LacZ和GUS报告基因的表达。[结论]Vta1可能参与杆状病毒AcMNPV子代病毒粒子的组装和/或出芽释放过程