基于谷氨酸棒状杆菌的茶氨酸生物合成工程菌构建

将茶树谷氨酰胺合成酶基因（CsGS1;3，GenBank登录号AB117934.1）克隆，并与穿梭表达载体pZ8-1连接，将重组质粒通过电转法转到谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032感受态细胞，构建了谷氨酸棒状杆菌重组菌株Corynebacterium glutamicum ATCC 13022/pZ8-CsGS1;3。再将成功构建的该重组菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）在30℃下诱导4 h后，进行体外酶活反应。反应产物用薄层层析（TLC）检测发现有产物茶氨酸生成，经液相色谱三重四级杆串联色谱仪（LC-MS）进一步检测确定其合成产物为茶氨酸