昆虫细胞表达基因Ⅶ NDVHN基因的免疫效力研究

利用杆状病毒表达系统对Ⅶ NDV HN基因进行表达研究。RT-PCR扩增HN基因，将其克隆到pFastBacHT A载体中，阳性重组质粒转化DH10Bac感受态细胞，PCR鉴定获得阳性克隆，碱裂解法提取阳性质粒，转染Sf9昆虫细胞，获得含HN基因的重组杆状病毒质粒，重组病毒感染Sf9细胞72 h后，进行SDS-PAGE电泳、间接免疫荧光和Western-blot试验。免疫SPF鸡，间接ELISA测定抗体滴度，攻毒保护试验检测重组HN蛋白保护性。结果显示，目的蛋白HN在昆虫细胞中有特异性表达，该蛋白诱导了高滴度的NDV特异性抗体，具有良好的免疫原性；强毒攻击保护率达到75%，与La sota疫苗组保护率接近，均明显高于阴性对照组。上述结果为NDV新型亚单位疫苗奠定了基础