利用Golden Gate “One-POT”技术组装运动发酵单胞菌转录单元

为研究运动发酵单胞菌合成生物学及代谢工程，评估运动发酵单胞菌内源启动子及终止子，需要建立一种方便有效的多基因代谢途径组装方法. 通过Golden Gate方法构建了一个含有运动发酵单胞菌乙醇脱氢酶2编码基因启动子区（Padh2）、丙酮酸脱羧酶编码基因终止子区（Tpdc）和绿色荧光蛋白开放阅读框（gfp）的人工转录单元. 将含有IIS型限制内切酶BbsI识别和酶切序列的特异性接头添加到Padh2、Tpdc和gfp序列两侧，从而保证在一个反应体系中完成上述3个生物元件的酶切和连接，因此该技术被称作“One-POT”. 插入上述人工转录单元的穿梭质粒导入大肠杆菌和运动发酵单胞菌后可检测到发出绿色荧光的细胞. 结果显示通过Golden Gate方法可有效组装转录单元所需DNA生物元件. 本研究不仅可为运动发酵单胞菌合成生物学和代谢工程研究，尤其是设计多基因代谢途径组装方面提供技术工具，也可为评估运动发酵单胞菌内源启动子和终止子提供一种有效方法. （图5 表2 参34