羟丙基-β-环糊精对新金色分枝杆菌合成ADD蛋白质组的影响

新金色分枝杆菌（Mycobacterium neoaurum JC-12）可降解植物甾醇合成药物中间体雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮（ADD），由于植物甾醇的溶解度较低，因此在转化体系中添加羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）作为助溶剂. 本次研究在HP-β-CD存在与否条件下利用二维凝胶电泳（2-DE）和基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术（MALDI-TOF-MS）分离和鉴定新金色分枝杆菌蛋白质表达量的差异；再使用反转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）对挑选出的5个与ADD合成相关的蛋白质编码基因进行转录水平分析. 结果表明，2-DE图谱及质谱结果共鉴定到12个具有显著差异表达量的蛋白质点. 其中，参与植物甾醇降解合成ADD途径的乙醇脱氢酶、烯酰-CoA水合酶、乙酰-CoA乙酰基转移酶、3α,7α,12α-三羟基-5β-胆甾-24-烯酰-CoA水合酶和4,5-9,10-双断裂-3-羟基-5,9,17三氧雄甾-1(10),2-二烯-4-酸酯水解酶的蛋白质表达量在羟丙基-β-环糊精存在条件下显著提高；参与糖、脂、氨基酸和核酸类物质代谢的乙二醛酶、3-氧代酰基-ACP合酶、3-酮脂酰-ACP还原酶、分支酸合酶、氮调节蛋白P-II和DNA结合蛋白的蛋白质表达量也有一定的提高，但磷酸甘油酸变位酶的蛋白质表达量有所下降. 通过RT-qPCR分析的转录水平的变化情况与2-DE得到的蛋白水平的结果相符. 综上所述，羟丙基-β-环糊精可促进降解植物甾醇合成ADD代谢途径及糖、脂、氨基酸和核酸类物质代谢途径相关酶的表达量. （图3 表3 参24