海洋微生物Fulvimarina manganoxydans磷酸酶FM2382的克隆表达及酶学性质

为促进海洋微生物及基因资源的开发应用，将海洋微生物Fulvimarina manganoxydans sp. nov. 8047的磷酸酶基因fm2382在大肠杆菌（Escherichia coli）中异源表达、纯化，并研究磷酸酶FM2382的酶学性质. 设计引物从F. manganoxydans sp. nov.8047基因组DNA中扩增出磷酸酶fm2382基因，克隆至pET28（a）表达载体中，构建重组菌株，表达纯化后对磷酸酶FM2382的酶学性质进行分析. 结果表明：磷酸酶FM2382最适反应温度为45 ℃，最适反应pH 7.1，70-80 ℃高温处理1 h后仍具35%左右的活力，在pH 7.1-9.0范围内具有较好的稳定性；金属离子对磷酸酶活力有不同程度的影响，其中Mg2+、Mn2+具有强烈的激活作用；Km = 1.42 × 10-3 mol/L，Vm = 2.5 × 10-7 mol/L. 本研究表明F. manganoxydans sp. nov.中获得的fm2382基因可以在大肠杆菌中高效表达且FM2382是一种新的磷酸酶. （图9 表1 参20