大鼠雪旺细胞系RSC96条件培养液对少突胶质前体细胞的体外增殖作用

目的观察大鼠雪旺细胞系RSC96 细胞条件培养液（RSC96-CM）对少突胶质前体细胞（OPCs）增殖的影响，探讨其作 用机制。方法应用免疫粘附法从胚胎15d 的SD 大鼠脊髓分离OPCs，应用BrdU 掺入实验检测OPCs的增殖，应用RT-PCR 技术检测PDGF-AA和bFGF 在RSC96 细胞的表达，应用ELISA 技术检测RSC96-CM 中PDGF-AA和bFGF 蛋白的浓度，以 特异性抑制剂阻断观察PDGF-AA和bFGF 在RSC96-CM诱导OPCs 增殖中的作用，以特异性抑制剂观察ERK和JNK信号 途径在RSC96-CM诱导OPCs增殖中的作用。结果不同浓度的RSC96-CM培养的OPCs，其BrdU+细胞的比例与对照组相 比均显著增加（P<0.05），其中，在含50% RSC96-CM 的培养液中培养的OPCs 的BrdU+细胞的比例达高峰。RT-PCR 证实 RSC96 细胞显著表达PDGF-AA和bFGF 的mRNAs，ELISA 结果发现，RSC96-CM中PDGF-AA和bFGF 的蛋白浓度分别是 我们前期报道的B104CM中PDGF-AA和bFGF的蛋白水平的0.87 倍和0.92 倍。PDGFR的特异性抑制剂AG1295 和bFGFR 特异性抑制剂PD173074 均显著降低RSC96-CM 诱导的OPCs 增殖；此外，Erk1/2 特异性抑制剂U0126 和JNK 特异性抑制 SP600125的预孵也显著降低RSC96-CM诱导的BrdU+ OPCs的比例（P<0.01）。结论RSC96-CM显著诱导OPCs的增殖，其通 过RSC96分泌的PDGF-AA和bFGF激活Erk1/2和JNK信号途径而发挥作用；RSC96-CM也可以作为OPCs常规培养的扩增剂