奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶多克隆抗体的制备和鉴定

目的表达、纯化奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶（PPK）蛋白，制备PPK多克隆抗体。方法利用分子生物学软件分析奇异变 形杆菌PPK的抗原性、疏水性等参数，选取N端较保守的309个氨基酸，并对其基因序列进行密码子优化以利于原核表达。合 成新的基因序列后插入pET28b(+)质粒，转化入转化宿主菌BL21（DE3），诱导、表达融合蛋白。通过镍琼脂糖亲和层析技术，将 获得的融合蛋白进行纯化。以纯化的蛋白作为免疫原并结合使用佐剂，背部多点注射新西兰大白兔，ELISA检测兔血清效价， Western Blotting验证抗体特异性。结果成功构建了奇异变形杆菌PPK的原核表达重组质粒，可在0.5 mmol/L IPTG、37 ℃条 件下获得较好的诱导、表达；利用镍柱纯化后的PPK蛋白与免疫佐剂一起，采用背部多点接种新西兰大白兔，制备了效价高的兔 抗血清。ELISA检测血清效价达到1∶512 000，Western Blotting对ppk基因缺失株及其野生株进行验证显示抗体特异性良好。 结论利用pET28b(+)载体可构建奇异变形杆菌PPK的原核表达重组质粒，表达、纯化后的蛋白与佐剂共同免疫新西兰大白兔， 可获得效价高、特异性良好的兔多克隆抗体血清，为奇异变形杆菌聚磷酸盐激酶的检测以及深入研究PPK在奇异变形杆菌致病 中的作用奠定了基础