沉默核仁素可诱导大鼠神经干细胞的分化

目的探讨核仁素（nucleolin）对原代神经干细胞（NSCs）分化的影响及其相关机制。方法构建核仁素siRNA腺病毒表达 载体，将经鉴定正确的重组腺病毒质粒转染HEK293A细胞，包装得到具有感染能力的nucleolin-siRNA重组腺病毒。病毒体外 感染原代NSCs，采用Western blot检测nucleolin蛋白的表达情况，Nucleolin-siRNA对神经干细胞Nestin、Wnt3、β-catenin蛋白 表达的影响；采用免疫细胞化学检测nucleolin-siRNA 对神经干细胞分化的影响。结果经酶切和测序鉴定均证实 nucleolin-siRNA重组腺病毒载体构建成功, 其插入序列正确无误。Western blot检测结果显示，转染nucleolin-siRNA2的细胞 nucleolin表达明显受到抑制。siRNA+组NSCs分化为NSE阳性细胞和GFAP阳性细胞的分化率明显比CON组、siRNA-组增加， 且差异具有统计学意义（P<0.01）。与阴性对照组相比，siRNA+组Nestin的表达明显减少，Wnt3表达明显增多，β-catenin入核明 显增多，其差异具有统计学意义（P<0.05）。结论本研究成功地构建了针对nucleolin 基因的siRNA 重组腺病毒载体，沉默 nucleolin可诱导神经干细胞的分化，其机制可能与Wnt信号转导通路的激活有关