丝胶蛋白通过自噬通路调控人胃癌MKN45细胞的增殖

目的探索丝胶蛋白对胃癌MKN45细胞增殖活性的影响及作用机制。方法用LC3双荧光自噬病毒转染胃癌MKN45细 胞，用嘌呤霉素筛选LC3双荧光自噬病毒的MKN45稳转株。实验分为3组，空白对照组（Blank）、丝胶蛋白阳性组（Sericin）、丝 胶蛋白加自噬抑制剂组（Sericin+3-MA）。培育48 h后用cck-8试剂测定细胞增殖活性，根据所测数据得出丝胶蛋白半数致死浓 度IC50，按此浓度处理细胞并培育48h，用流式细胞仪分别检测凋亡、周期，电镜检测细胞自噬，Western blotting检测LC3、p62、 Beclin蛋白表达。将种植胃癌的裸鼠分为2组，即对照组（Saline）、丝胶蛋白阳性组（Sericin），每组5只；分别注射生理盐水和丝 胶蛋白，测量肿瘤体积和质量。结果丝胶蛋白阳性组（Sericin）与空白对照组（Blank）相比，MKN45细胞增殖活性明显受到抑 制，且细胞凋亡增加（P<0.01），细胞阻滞于G2/M期（P<0.01）。相对于空白组，丝胶蛋白处理后细胞在电镜观察到自噬小体明显 增多；Western blotting检测到LC3-2 表达上调，Beclin表达增加，p62表达逐渐下调；丝胶蛋白加自噬抑制剂组（Sericin+3-MA） 实验结果则介于两者之间。动物实验中，丝胶蛋白阳性组（Sericin）与对照组（Saline）相比，肿瘤体积和质量有显著下降。结论 丝胶蛋白可通过调控胃癌MKN45细胞自噬影响细胞增殖活性