N端截短对嗜酸普鲁兰芽孢杆菌普鲁兰酶酶学特性及功能的影响

采用N端截短方式对嗜酸普鲁兰芽孢杆菌Bacillus acidopullulyticus普鲁兰酶进行分子精简，构建不同形式的N端截短突变体，考察截短突变对表达水平、酶学特性及实用性能的影响。研究结果表明：缺失X45后，目标蛋白几乎全部以不溶形式的包涵体形式存在；缺失CBM41可引起可溶性表达量的大幅提升。缺失CBM41 (M1)、X25 (M3)、亦或两结构域同时缺失 (M5) 的变体最适温度 (60 ℃) 和最适pH (5.0) 与野生型相同。突变体M1和M5的Km值分别提高至野生型的2.4倍和3.1倍，kcat/Km测定结果显示M5催化效率下降明显。突变体M1、M3和M5对分子量较大底物的水解效率略有下降，但对小分子底物的水解效率影响不明显。野生型及突变体M1、M3和M5与糖化酶复配使用时，糖化值 (DE) 分别为93.6%、94.7%、94.5%和93.1%。上述结果表明，切除CBM41和/或X25结构域的普鲁兰酶变体不影响其在淀粉糖化过程中的应用，且由于分子量减小更易于异源表达，截短突变体可能更适合于工业化生产