FOXG1在结直肠癌侵袭及转移中的作用及机制

构建叉头框G1 (Forkhead box G1, FOXG1) 的慢病毒干扰 (shRNA) 质粒及表达质粒，通过敲低和过表达FOXG1探讨其对结直肠癌细胞上皮-间质转化EMT的作用及其机制。应用Western blotting检测FOXG1在RKO、SW480、SW620、LOVO、DLD-1五种结直肠癌细胞中蛋白的表达水平，设计并合成FOXG1的shRNA片段 (shFOXG1)，运用DNA重组技术获得重组质粒，经双酶切技术及测序方法鉴定后进行慢病毒的包装、纯化及稳定转染，经筛选后获得稳定的结直肠癌细胞株，通过Western blotting和qRT-PCR技术检测FOXG1敲低和过表达效率及EMT关键因子E-cadherin、Vimentin、Fibronectin、Snail、Twist mRNA和蛋白的变化，光学显微镜观察敲低后细胞形态学变化，通过划痕实验检测迁移能力变化，Transwell检测侵袭迁移能力的变化。5种结直肠癌细胞中，FOXG1在RKO细胞中蛋白表达量最高，而在DLD-1细胞中表达量最低，与对照组相比较，在RKO细胞中敲低FOXG1，细胞形态由长梭型变成了类圆形或者多边形，细胞极性和紧密连接增加，细胞迁移距离明显降低，侵袭转移穿过小室的细胞数也明显减少，EMT关键因子E-cadherin表达增高，Vimentin、Fibronectin、Snail、Twist表达降低，过表达FOXG1组则相反。FOXG1在结直肠癌中高表达，这种基因的高表达能够促进结直肠癌细胞的侵袭和转移，对结直肠癌细胞的EMT起着重要的调控作用