猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4抗体制备与鉴定

为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) nsp4的抗体，根据HP-PRRSV TA-12株 (GenBank Accession No. HQ416720) 的nsp4基因序列，设计并合成一对引物。用RT-PCR扩增后克隆到原核表达载体pET-28a(+) 中，构建重组质粒pET28a-nsp4，转化至Trasseta(DE3)，经IPTG诱导重组蛋白获得了高效可溶性表达，大小约为26 kDa。经镍离子亲和柱 (Ni+-NTA) 纯化获得了高纯度重组蛋白，将纯化的nsp4蛋白免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。ELISA检测抗体效价可达106，Western blotting和IFA检测结果表明所制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应特异性，能够识别PRRSV感染宿主细胞中的nsp4蛋白。本研究成功制备了针对nsp4的多克隆抗体，为进一步研究nsp4的功能及PRRSV致病机制奠定了基础