坝上长尾鸡pmel基因核心启动子的鉴定

为探明坝上长尾鸡的前黑素小体蛋白 (Pre-melanosomal protein，Pmel) 基因核心启动子区，首先构建了双荧光素酶表达载体，通过脂质体瞬时转染鸡胚成纤维细胞DF1，并利用双荧光素酶检测试剂盒进行启动活性检测。成功克隆了坝上长尾鸡pmel基因5￠侧翼区片段1 268 bp，预测启动子区 (?1 200—+68) 含有2个CpG岛和多种转录因子结合位点，构建了9个含有不同长度pmel基因启动子片段的表达载体及1个核心启动子区突变载体，说明鸡pmel基因启动子的核心区域为?840—+68 bp，其中?840—?590 bp和?525—?266 bp区域为正调控区，?590—?525 bp区域为负调控区，多态位点 (?456、?435、?410、?374和?341) 对pmel基因启动子活性有较大影响